核酸检测的操作方法(核酸检测为什么不能排除hiv)

一、核酸检测操作流程有哪些

摘要：很多人以为核酸检测就是采集一下就完成了，其实核酸检测远比这复杂的多 ，核酸检测操作流程有采集分泌物 、进行留样、样本送检
、核酸提取、荧光PCR核酸检测 、核酸检测报告，很多操作步骤都要手工进行
，因此需要花费一定的时间 。核酸检测的原理是利用荧光定量PCR（聚合酶链式反应）。接下来本文将简单介绍核酸检测操作流程有哪些以及核酸检测的原理是什么，一起来看看吧！一
、核酸检测操作流程有哪些

目前 ，全国大部分城市都提供了核酸检测
，那么，核酸检测要经过哪些步骤呢？下面一起了解下核酸检测操作流程有哪些：

1、采集分泌物

首先 ，医务人员会使用咽拭子擦拭受检者鼻腔或者喉咙扁桃体处
，采集唾液分泌物，这个过程其实蛮疼的
。

2 、进行留样

将人体分泌物采集出来以后 ，咽拭子浸到保存液中
，将管子盖子旋好进行留样。

3
、样本送检

然后，将样本装入到干净的密封袋中封好 ，送到相关部分进行检测 。

4、核酸提取

相关部门将送来的样本
，送到指定实验室做核酸提取实验
。

5 、荧光PCR核酸检测

核酸提取出来以后，再使用荧光PCR进行检测使用 ，检测是否有扩增反应，也就是判断阴性还是阳性。

6
、出核酸检测报告

最后
，根据核酸检测的荧光PCR反应结果，得出核酸检测报告 ，本人查询结果即可 。

二、核酸检测的原理是什么

检测新型冠状病毒特异序列的方法最常见的是荧光定量PCR（聚合酶链式反应）
。因PCR反应模板仅为DNA
，因此在进行PCR反应前，应将新型冠状病毒核酸（RNA）逆转录为DNA。在PCR反应体系中 ，包含一对特异性引物以及一个Taqman探针
，该探针为一段特异性寡核苷酸序列，两端分别标记了报告荧光基团和淬灭荧光基团 。探针完整时 ，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；如反应体系存在靶序列
，PCR反应时探针与模板结合，DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性将探针酶切降解 ，报告基团与淬灭基团分离
，发出荧光
。

每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子产生。荧光定量PCR仪能够监测出荧光到达预先设定阈值的循环数（Ct值）与病毒核酸浓度有关 ，病毒核酸浓度越高，Ct值越小 。不同生产企业的产品会依据自身产品的性能确定本产品的阳性判断值
。

二 、核酸检测具体步骤

1
、核酸提取使用硅胶柱离心、磁性硅胶颗粒分离方法以及自动化仪器等商品化试剂或设备并按说明书操作。提取RNA时应注意防止RNA降解 。DNA应置于-20℃保存
，RNA和需长期保存的DNA应置于-80℃保存。

2 、逆转录合成cDNA
。逆转录cDNA合成反应需使用逆转录引物、dNTPs
、逆转录酶、RNA酶抑制剂 、DTT
、缓冲液和适量无RNA/DNA酶的超纯水以及RNA模板。在扩增仪或水浴箱中，在规定的温度和时间下进行逆转录反应 。

3、PCR扩增反应PCR反应需使用引物 、dNTPs
、DNA聚合酶、缓冲液 、和适量无RNA/DNA酶超纯水
、以及模板
。在扩增仪中 ，按照设定的程序进行扩增。使用二次扩增的套式PCR扩增方法 。

4、扩增产物定性分析；扩增产物常用分析方法是琼脂糖凝胶电泳法
，与分子量标准比较，判断扩增片段是否在预期的分子量范围内
。其它扩增产物分析方法还有限制性内切酶酶切分析 、特异性探针杂交分析以及DNA序列分析等。

5
、结果判定和完成报告单：每一次检测需同时做两个阳性对照、两个阴性对照 ，只有阳性对照扩增出预期的片段 、阴性对照没有扩增出任何片段、双份平行样品结果一致的情况下实验才成立
，可以作出核酸阳性或阴性反应结果的判定 。

扩展资料：

检测新型冠状病毒特异序列的方法最常见的是荧光定量PCR
。因PCR反应模板仅为DNA，因此在进行PCR反应前 ，应将新型冠状病毒核酸逆转录为DNA。在PCR反应体系中
，

包含一对特异性引物以及一个Taqman探针，该探针为一段特异性寡核苷酸序列 ，两端分别标记了报告荧光基团和淬灭荧光基团 。探针完整时
，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；

如反应体系存在靶序列，PCR反应时探针与模板结合 ，DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性将探针酶切降解，报告基团与淬灭基团分离
，发出荧光
。

每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子产生。荧光定量PCR仪能够监测出荧光到达预先设定阈值的循环数与病毒核酸浓度有关 ，病毒核酸浓度越高
， Ct值越小 。不同生产企业的产品会依据自身产品的性能确定本产品的阳性判断值。

参考资料：百度百科——核酸检测法

三
、核酸检测步骤

核酸检测目前都是取咽拭子的方法（病毒感染口腔粘膜上皮后会寄宿于口腔粘膜上皮，通过采咽拭子达到取样目的） ，1小时内送到专门检测室内进行
。这个性质决定不可能每个患者想做就能立马做
，比如大半夜来的患者就做不了，只能等待第二天仪器开机。

取咽拭子是一个高危的操作 。据目前临床研究来看 ，新型冠状病毒感染肺炎的传播途径有三种
，直接传播、气溶胶传播 、接触传播
。其中飞沫混合在空气中，形成气溶胶 ，吸入后导致感染。所以对于取样的人员而言
，有被感染的风险 。

结果判定:

如果测试结果为阴性，患者相对安全 ，但不能完全排除危险（因为可能由于标本质量或者存在抑制物等问题导致结果假阴性）；如果测试结果为阳性，该患者就有危险性
。第一步和第二步都有严格的操作流程和操作条件。整体耗时在1-4小时之间 。

目前中南大学湘雅医院的核酸检测一般是11点开始统一上机
，16点左右统一进行结果报告和上报
。在进行核酸检测期间和等待核酸检测期间，患者都不能随意离开医院。

如果核酸连续两次复查阴性 ，无临床症状
，进一步根据病情解除隔离 。如果核酸阳性，轻症可以戴好口罩居家隔离 ，我们备好了居家隔离建议书
，写得非常详细，非轻症则必须依法隔离及收治
。

扩展资料：

核酸检测的“假阳性 ”是指患者本来没感染新冠病毒 ，但核酸检测出现阳性结果。此“假阳性”的出现通常是由于实验室检测过程中标本间的交叉污染或实验室核酸污染造成的 。在技术层面上讲
，只要实验室严格落实质控工作，可有效避免“假阳性
”的产生。

核酸检测的“假阴性”是指从患者的临床症状
、肺部影像学结果甚至流行病学史都支持为新冠肺炎 ，但患者病毒核酸检测结果为“阴性 ”
，检测结果与临床不符
。

参考资料：百度百科-核酸检测法

参考资料：华声在线-中南大学湘雅医院：关于做核酸检测的三个真相

四、新冠核酸检测怎么做

自己做的抗原上传健康码的方法如下：

微信 、支付宝搜索“疫测达
”小程序，然后点击“新冠抗原检测-去记录”。选择“去记录 ”填写个人的信息 ，准确填写 。然后会让你上传抗原检测的结果图片，还有检测产品的二维码
、条形码
，信息都填完了点击提交即可
。

微信搜索“穗康
”小程序，点击我的 ，选择“抗原检测”点击添加
，会进入到抗原检测上传的页面。填写自己的基本信息，姓名、身份证号 、采样时间
、采样结果、试剂盒图片等等 ，最后点击提交即可 。

抗原检测准确率抗原检测一般指新型冠状病毒检测
，新冠抗原检测较核酸检测准确率约80%，但无症状感染者的准确率降至50%
。抗原检测和核酸检测比起来 ，准确率没有核酸检测高
，核酸检测依然是新冠病毒感染的确诊依据。

新冠快检一般指的是新型冠状病毒的抗原检测，新型冠状病毒的抗原检测一般是一个小型的试剂盒 ，优点就是操作简单
，快速，方便 ，一般15分钟左右就可以出结果 。新型冠状病毒的抗原检测，可以用来对大面积的人群进行初筛
，几乎所有的新型冠状病毒抗原检测都使用新型冠状病毒核衣壳蛋白作为靶标，因此受变异株影响的可能性较小 ，准确率也较高
。

五 、核酸检测是怎么做的具体是检测什么东西

核酸检测需要去正规的医院或者防疫中心进行检测。

检测步骤：

1
、首先
，核酸检测盒子，也就是现在用于新冠状病毒检测的方式 ，这个盒子中主要检测“法宝 ”采用咽拭子 。用咽拭子擦拭咽后壁及双侧咽扁桃体处各5－10次
，且不断旋转拭子
。

2、医务人员进行留样，将拭子头浸入细胞保存液中 ，折断尾部后立即旋紧管盖子。

3 、保存
，将样本管放入密封袋中及时送检，而送检过程中需要严格的运输环境 ，2－8摄氏度保存 。

4、操作核酸提取（反应管理）
，将灭活病毒后的样本进行核酸提取，用于后续检测。

5
、荧光PCR核酸检测 ，也就是．上机器检测，将提取物进行荧光PCR扩曾反应
，需要70－－80分钟
。

核酸检测就是通过检测荧光信号的累积，来确定样本中是否有相应的基因核酸。目前核酸检测试剂盒 ，多数采用荧光定量PCR方法 。检测原理就是
，以独特的基因序列，为检测靶标 ，通过PCR扩增
，使我们选择的这段靶标DNA序列指数级增加，每一个扩增出来的DNA序列 ，都可与我们预先加入的一段荧光标记探针结合
，产生荧光信号，扩增出来的靶基因越多 ，累积的荧光信号就越强
。如果没有靶基因扩增
，因此就检测不到荧光信号增强。核酸检测试剂盒的组分中，检测引物和探针最为关键 。灵敏特异的扩增引物 ，对检测结果的准确，与否发挥着至关重要的作用
。